MAT 法熱原檢測背景值偏高會干擾結果判讀,需從試劑、操作兩方面解決。試劑相關問題中,非特異性活化(如試劑含微量熱原)會導致細胞異常分泌 IL-6,需選用低內毒素的試劑與耗材;檢測試劑添加過多(如抗體濃度過高)會增加非特異性結合,需按說明書稀釋試劑或降低推...
熱原是指微量即可引發恒溫動物體溫異常升高的物質,分為內源性(如細胞因子)與外源性兩類,外源性熱原又涵蓋微生物來源(革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS、革蘭氏陽性菌脂磷壁酸 LTA、病毒、真菌等)與非微生物來源(灰塵、橡膠降解產物等)。傳統細菌內毒素檢查法(BET)...
MAT法熱原檢測特定標準品與傳統細菌內毒素國家標準品存在本質差異,需明確區分以保障檢測準確性。MAT 特定標準品為大腸桿菌(E.coli 0113:H10:K)菌株制備,經全國 5 家藥品檢驗所(含中檢院)用凝膠法、動態濁度法及動態顯色法協作標定,溯源至國...
醫療器械(如輸液器、注射器、植入式設備)若攜帶內毒素,可能通過血液、組織接觸引發異常反應或炎癥反應。其檢測需遵循 “模擬臨床使用” 原則:采用浸提液(如 0.9% 氯化鈉溶液或注射用水)在 37℃±1℃下浸提器械表面內毒素,再通過 LAL 或 rFC 法檢...
含消除炎癥成分的樣品可能抑制 IL-6 產生,需通過科學評估排除干擾,確保 MAT 法熱原檢測結果準確。根據藥典要求,若樣品能抑制單核細胞促炎癥因子釋放,需通過以下步驟驗證適用性:首先,選擇樣品 A、2A、4A 倍稀釋(均不超過上限有效稀釋倍數 MVD),...
MAT法熱原檢測中,樣品與細胞共培養時長需嚴格控制,以保障炎癥因子分泌量穩定。說明書要求共培養 24 小時,雖未明確允差,但實驗驗證顯示,±30 分鐘的允差對結果無明顯影響 —— 細胞因子(如 IL-6)分泌具有時間依賴性,24 小時左右達到分泌平臺期,半...
內毒素檢測中,樣品中的蛋白質或酶的修飾作用易破壞鱟試劑的反應體系,導致檢測結果失真。鱟試劑檢測內毒素的本質是一系列絲氨酸蛋白酶的酶促放大過程,若樣品中存在氧化劑、抗氧化劑、蛋白水解劑或專一失活劑,會直接滅活反應所需的酶;而乙醇、苯酚等物質則會導致蛋白質變性...
PBMC(外周血單個核細胞)的供體差異會直接導致熱原檢測結果的波動,主要體現在 IL-6 釋放水平的不一致。不同供體的 PBMC,其單核細胞比例、TLR 受體表達量、免疫活性狀態存在差異:有的供體 PBMC 受熱原刺激后, IL-6 釋放量高;有的則極低,...
MAT 試劑盒配套的即用型細胞存在明確的傳代限制,且商業化傳代需獲得授權,關鍵是保障細胞質量與檢測可靠性。首先,即用型細胞經特殊工藝優化,已處于較好的活性與熱原響應狀態,不適合傳代,傳代后細胞會出現 TLR 受體表達下降、炎癥因子分泌減少等問題,導致熱原檢...
在開展內毒素檢測時,樣品的 pH 值與二價離子(Mg2?、Ca2?)水平是影響鱟試劑酶促反應的關鍵因素,直接關系檢測結果的準確性。鱟試劑檢測內毒素依賴絲氨酸蛋白酶的級聯放大反應,該反應的合適 pH 值范圍為 6.0-8.0,若樣品過酸或過堿,會快速降低酶活...
歐盟在熱原檢測方法選擇上,以動物保護和檢測準確性為導向,形成明確的法規傾向。首先,歐盟禁止家兔法(PRT 法)這類動物實驗,要求采用替代方法,單核細胞活化試驗(MAT 法)因符合 3R 原則(替代、減少、優化),被納入歐洲藥典(EP2.6.30),成為熱原...
基于單核細胞系的穩定性,MAT 熱原檢測可將復孔數從藥典要求的≥4 降至≥3。PyroSHENTEK?熱原檢測試劑盒數據顯示,單核細胞系標曲的 4 復孔與 3 復孔,各濃度點(0.0125-1.0EU/mL)的準確度(相對偏差)與精密度均在標準范圍內,無明...
低內毒素回收(LER)與傳統鱟試劑干擾(抑制 / 增強)在多維度存在差異,準確區分對優化內毒素檢測至關重要。表現上,LER 是內毒素回收率<50%,傳統干擾是反應抑制或增強;成因上,LER 由螯合劑 + 表面活性劑協同或蛋白質電荷結合引發,傳統干擾因 pH...
熱原檢測MAT法的法規地位持續提升,已成為多國藥典認可的熱原檢測替代方法。歐洲藥典(EP)是推動 MAT 應用的關鍵力量:通則 2.6.30 明確 MAT 可替代家兔熱原試驗(RPT),且能同時檢測內毒素與非內毒素熱原;2024 年歐洲藥典委員會批準刪除所...
內毒素檢測常與熱原檢測混淆,二者既有關聯又有區別:熱原是指所有能引起發熱的物質(包括內毒素、病毒、真菌等),通過傳統家兔熱原試驗檢測;內毒素是熱原的主要成分(占 90% 以上),檢測更具特異性。目前,家兔熱原試驗因操作復雜、動物成本高,已逐漸被單核細胞活化...
PyroSHENTEK?熱原檢測試劑盒依據 ICH Q2 (R2)、《中國藥典》(如通則 9301)及歐洲藥典(EP 2.6.30)要求,完成了線性、范圍、定量限、準確度、精密度、耐用性等全維度性能驗證。線性方面,0.0125-1.0EU/mL范圍內擬合良...
內毒素檢測常與熱原檢測混淆,二者既有關聯又有區別:熱原是指所有能引起發熱的物質(包括內毒素、病毒、真菌等),通過傳統家兔熱原試驗檢測;內毒素是熱原的主要成分(占 90% 以上),檢測更具特異性。目前,家兔熱原試驗因操作復雜、動物成本高,已逐漸被單核細胞活化...
MAT 法與傳統家兔法在熱原檢測中,性能差異明顯,MAT 法在準確性、效率與合規性上更具優勢。從結果評判來看,MAT 法以 “加標回收率 50%-200%、供試品濃度 < 規定限值(CLC)” 為合格標準,靈敏度達 0.0125EU/mL,可準確定量熱原濃...
MAT 法熱原檢測的穩定性需從細胞、試劑、操作、樣品四維度嚴格把控。細胞層面,細胞活性與純度直接決定熱原響應能力,活性不足會減少炎癥因子分泌,純度低則引入雜細胞干擾;細胞批次間一致性也關鍵,TLR 受體表達、倍增時間差異會導致結果波動。試劑與耗材方面,標準...
MAT 法與傳統家兔法在熱原檢測中,性能差異明顯,MAT 法在準確性、效率與合規性上更具優勢。從結果評判來看,MAT 法以 “加標回收率 50%-200%、供試品濃度 < 規定限值(CLC)” 為合格標準,靈敏度達 0.0125EU/mL,可準確定量熱原濃...
熱原是能引發恒溫動物體溫異常升高的物質總稱,主要成分為細菌內毒素(革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS),同時涵蓋病毒、真菌毒素、支原體等非內毒素熱原,其檢測是保障藥品與醫療器械安全性的關鍵環節。當前熱原檢測已形成 “特異性檢測 + 廣譜篩查” 互補的完整體系:以鱟...
內毒素檢測結果誤差可能源于多環節:試劑方面,鱟試劑(LAL )或試劑批間差異、過期試劑活性下降會導致結果偏差,需通過試劑驗收(如陽性對照回收率驗證)確保質量;操作方面,實驗器具未除熱原(如玻璃器皿未干熱滅菌)、加樣體積不準確會引入污染或誤差,需嚴格執行 S...
如何準備樣品進行內毒素檢測呢?測試前,需要根據樣品實際情況進行樣本前處理。大多數樣品只需要稀釋,使用內毒素檢測試劑盒進行測試即可。如果樣品有蛋白酶干擾并導致假陽性結果,建議對樣品稀釋并70°C加熱5-15分鐘進行熱滅活處理。如需要,可以對滅活樣品進行進一步...
傳統細菌內毒素檢查法(BET)只能檢測革蘭氏陰性菌的 LPS,無法識別革蘭氏陽性菌 LTA、真菌酵母多糖、病毒鞭毛蛋白等非內毒素熱原,存在漏檢風險;同時,部分樣品(如脂質體、表面活性劑制劑)會因內毒素吸附導致低內毒素回收(LER),BET法難以準確定量。M...
湖州申科建立了標準化的低內毒素回收(LER)技術服務流程,全周期支撐內毒素檢測優化:7 個自然日內完成客戶溝通與 LER 確認,用天然鱟、重組鱟等方法檢測并出具報告;60 個自然日開展方法開發,分析 LER 成因(如螯合劑、蛋白質 IP)并研究去掩蔽方案;...
針對單核細胞活化反應測定法(MAT)通過檢測內毒素的生物活性,有效規避低內毒素回收(LER)對內毒素檢測的影響。其原理是:熱原(包括被掩蔽的 LPS)活化單核細胞表面的 TLR 受體,釋放 IL-6 等細胞因子,通過 ELISA 檢測 IL-6 濃度,結合...
內毒素檢測重組級聯試劑(rCR)與天然鱟試劑在原料、性能和可持續性上存在本質區別。原料方面,天然鱟試劑依賴鱟血采集,受動物資源限制,而 rCR 通過基因工程表達 C、B 因子及凝固酶原,無動物源性,供應穩定。特異性上,天然鱟試劑因含 G 因子,易與 β-D...
低內毒素回收(LER)的主要形成機制之一是螯合劑與非離子表面活性劑的協同作用,直接影響內毒素檢測結果。第一步,樣品中的螯合劑(如檸檬酸鹽)會去除二價陽離子(Mg2?、Ca2?),削弱 LPS 聚集體的鹽橋結構,降低其剛性;第二步,表面活性劑(如吐溫 20)...
MAT法熱原檢測中,獲得標準 S 型標曲需通過顯色時機控制與圖形調整實現,確保標曲擬合準確。在顯色時機控制上,加入 TMB 底物后,孔內顏色會逐漸變藍,且隨反應時間加深,當標準品濃度梯度呈現明顯藍色差異(如高濃度孔深藍色、低濃度孔淺藍色)時,即可加入終止液...
熱原是能引發恒溫動物體溫異常升高的物質總稱,主要成分為細菌內毒素(革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS),同時涵蓋病毒、真菌毒素、支原體等非內毒素熱原,其檢測是保障藥品與醫療器械安全性的關鍵環節。當前熱原檢測已形成 “特異性檢測 + 廣譜篩查” 互補的完整體系:以鱟...