上海高效熱原檢測技術服務

來源：發布時間：2025-10-11

MAT 法熱原檢測中，細胞傳代的代次控制是保障檢測穩定性的關鍵，需結合細胞特性與文獻數據制定標準。參考行業文獻，單核細胞系（如 HL-60、THP1）的使用代次通常不超過 20 代，代次過高會導致細胞生物學特性改變：一是 TLR 受體表達下降，如 TLR4 表達量在 20 代后下降 40%，導致內毒素檢測靈敏度降低；二是細胞倍增時間延長，從 24 小時延長至 36 小時，影響共培養時長的準確性；三是炎癥因子分泌減少，IL-6 分泌量在 20 代后下降 35%，導致熱原濃度低估。申科對配套的 HL-60 細胞系進行代次穩定性驗證，結果顯示：1-15 代細胞的熱原響應性一致（加標回收率 85%-125%），16-20 代回收率波動至 70%-130%，21 代后回收率 < 70%，因此建議控制在 1-15 代使用。實驗室需建立細胞代次記錄制度，每傳代 1 次記錄代次，達到 15 代后及時更換新批次細胞，并驗證新批次細胞與舊批次的一致性（如檢測同一樣品，結果偏差≤20%），確保不同代次細胞的檢測結果穩定。

在藥品安全語境中，熱原特指細菌性熱原—微生物代謝產物、細菌尸體及內毒素的統稱。上海高效熱原檢測技術服務

MAT法熱原檢測中，ELISA 加終止液后的讀數時間需嚴格控制，以保障 IL-6 檢測信號穩定。湖州申科生物MAT試劑盒說明書明確要求，終止液添加后需在 10 分鐘內完成讀數，且需避光操作 —— 原因在于，終止液（如硫酸）會終止 TMB 顯色反應，但生成的黃色產物在光照下易降解，超過 10 分鐘后 OD 值會下降，導致 IL-6 檢測值偏低。讀數前需進行 30 秒震蕩混勻，確保孔內液體濃度均勻，避免因局部濃度差異導致復孔 OD 值波動。酶標儀波長需設置為 450nm，若儀器含 600nm 參考波長，可同時檢測 600nm 波長以扣除背景干擾（如細胞碎片導致的光散射），提升檢測準確性。需注意的是，讀數時不可覆蓋封板膜或蓋子，避免膜上凝結的水蒸氣滴入孔中，導致 OD 值異常升高。若因儀器故障無法及時讀數，需將微孔板密封后置于 4℃避光保存，并在 30 分鐘內完成讀數，同時在記錄中注明延遲原因，評估延遲對結果的影響（如延遲 20 分鐘，OD 值可能下降 15%，需校正后使用）。

上海疫苗熱原檢測體系湖州申科熱原檢測試劑盒中單核細胞系表面有多種Toll樣受體，可響應革蘭氏陽性菌、病毒等熱原。

一次合格的 MAT 法熱原檢測，需同時滿足 “合格標曲” 與 “合格樣品檢測值及回收率” 兩大關鍵條件。合格標曲需具備四要素：一是良好線性，采用 4-Parameter Logistic 擬合，R2 需接近 1.0，避免線性不佳導致定量偏差；二是良好信號值，各濃度點 OD 值需呈梯度變化，高濃度點 OD 值需足夠（如上限濃度 OD600 達 1.0 左右），信號過低會影響靈敏度；三是良好 CV，復孔間 CV 需控制在合理范圍（定量限內≤25%、定量上下限≤30%），確保重復性；四是良好背景值，陰性對照 OD 值需低于標曲下限濃度點 10%，排除外源污染。合格樣品檢測值則需滿足加標回收率在 50%-200%，例如文檔中某樣品 10 倍稀釋回收率 41.3%（不合格），20 倍 71.3%（接近合格），40 倍 97.7%（合格），需在 MVD 范圍內調整稀釋倍數，同時樣品熱原濃度需低于規定限值（CLC），方可判定樣品符合要求。

MAT法熱原檢測中，獲得標準 S 型標曲需通過顯色時機控制與圖形調整實現，確保標曲擬合準確。在顯色時機控制上，加入 TMB 底物后，孔內顏色會逐漸變藍，且隨反應時間加深，當標準品濃度梯度呈現明顯藍色差異（如高濃度孔深藍色、低濃度孔淺藍色）時，即可加入終止液；若儀器含 600nm 波長，可在終止前檢測高濃度標準品的 OD600nm 值，當達到 1.0 左右時終止，此時顯色反應處于線性期，終止后顏色由藍變黃，信號強度約增強 3 倍，易形成 S 型曲線。在圖形調整上，若標曲擬合后未呈現明顯 S 型，可通過調整坐標軸范圍優化—如將縱軸（OD 值）范圍設為 0-2.5，橫軸（熱原濃度）設為對數坐標，突出低濃度區的拐點與高濃度區的平臺區，使曲線更接近 S 型。此外，標曲配制需確保濃度點單獨配制（非連續稀釋），避免高濃度標準品污染低濃度點，導致低濃度區信號異常升高，破壞 S 型曲線形態。通過以上方法，可有效提升 S 型標曲的成功率，保障熱原定量的準確性。

湖州申科熱原檢測試劑盒聯合了國內相關機構室間驗證，與傳統RPT法結果高度一致，符合法規要求。

MAT法熱原檢測特定標準品與傳統細菌內毒素國家標準品存在本質差異，需明確區分以保障檢測準確性。MAT 特定標準品為大腸桿菌（E.coli 0113:H10:K）菌株制備，經全國 5 家藥品檢驗所（含中檢院）用凝膠法、動態濁度法及動態顯色法協作標定，溯源至國際標準品，可同時檢測內毒素與非內毒素熱原；而傳統細菌內毒素國家標準品（如 9000EU 規格）源自大腸桿菌（E.coli O111:B4），只適用于內毒素檢測，無法識別非內毒素熱原。關鍵驗證數據顯示，用 MAT法檢測 9000EU 內毒素標準品時，加標回收率不在 50%-200% 的合格范圍，因此不能替代 MAT 特定標準品。值得注意的是，盡管 MAT 試劑盒用內毒素標準品繪制標曲，但經驗證其可識別非內毒素熱原—若樣品中存在非內毒素熱原（如革蘭氏陽性菌的脂磷壁酸），會觸發細胞陽性反應，有效避免漏檢，這也是 MAT 法在熱原防控中優于單一內毒素檢測的關鍵優勢。

憑借深厚的專業積累，湖州申科生物為行業提供可靠的熱原檢測解決方案。山東熱原檢測體系

基于人體免疫機制的 MAT 熱原檢測，為熱原檢測提供了新的可靠途徑。上海高效熱原檢測技術服務

革蘭氏陽性菌注射劑產品只依賴內毒素檢測存在安全風險，需結合熱原檢測特性制定防控方案。內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁的脂多糖成分，而革蘭氏陽性菌可產生非內毒素熱原（NEPs），如脂磷壁酸，這類物質同樣能引發人體發熱反應，若只檢測內毒素，可能遺漏 NEPs 污染，導致臨床用藥風險。對此，風險評估需重點關注三點：一是建議開展家兔法與內毒素檢測的一致性實驗，對比兩種方法的檢測結果，排查是否存在內毒素未檢出但家兔法陽性的情況；二是采用 MAT 法熱原檢測，其通過單核細胞活化機制，可同時識別內毒素與 NEPs，若 MAT 法檢測陽性，需進一步追溯 NEPs 來源；三是若無法排除 NEPs 風險，必須按藥典要求補充熱原檢測（如 MAT 法或家兔法），而非只依賴內毒素檢測。尤其對于新藥或工藝變更后的產品，需通過多方法驗證，確保熱原檢測覆蓋所有潛在致熱物質，保障臨床用藥安全。

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標簽：宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測內毒素檢測宿主細胞殘留DNA檢測熱原檢測

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