在 MAT 法熱原檢測(cè)中，PBMC（外周血單核細(xì)胞）與單核細(xì)胞系各有優(yōu)劣，單核細(xì)胞系更適合標(biāo)準(zhǔn)化檢測(cè)。PBMC 的優(yōu)勢(shì)在于免疫細(xì)胞成分豐富（含單核細(xì)胞、淋巴細(xì)胞等），對(duì)熱原反應(yīng)敏感，靈敏度相對(duì)較高；但局限同樣明顯 ——PBMC 需從不同供體獲取，供體免疫狀態(tài)差異會(huì)導(dǎo)致檢測(cè)結(jié)果不穩(wěn)定，且無(wú)法長(zhǎng)期保存，難以建立標(biāo)準(zhǔn)化方法學(xué)。單核細(xì)胞系（如 HL-60、MM6、THP1）則克服了 PBMC 的局限：細(xì)胞來(lái)源穩(wěn)定（可批量培養(yǎng)），TLR 受體表達(dá)覆蓋主要亞型（如 HL-60 表達(dá) TLR1-TLR9），對(duì)熱原反應(yīng)重復(fù)性好，更適合商業(yè)化試劑盒與法規(guī)檢測(cè)。不同單核細(xì)胞系性能也有差異：MM6/IL-6 法檢測(cè)限約 0.05EU/mL，THP1/TNF-α 法因 TNF-α 為一級(jí)免疫效應(yīng)物檢測(cè)限更低，但 TNF-α 穩(wěn)定性差；HL-60/IL-6 法檢測(cè)限與穩(wěn)定性均優(yōu)于前兩者，成為主流選擇。湖州申科生物MAT試劑盒選用 HL-60 細(xì)胞系，正是基于其優(yōu)異的穩(wěn)定性與熱原響應(yīng)適配多場(chǎng)景，確保不同批次檢測(cè)結(jié)果一致。

MAT法熱原檢測(cè)中，獲得標(biāo)準(zhǔn) S 型標(biāo)曲需通過(guò)顯色時(shí)機(jī)控制與圖形調(diào)整實(shí)現(xiàn)，確保標(biāo)曲擬合準(zhǔn)確。在顯色時(shí)機(jī)控制上，加入 TMB 底物后，孔內(nèi)顏色會(huì)逐漸變藍(lán)，且隨反應(yīng)時(shí)間加深，當(dāng)標(biāo)準(zhǔn)品濃度梯度呈現(xiàn)明顯藍(lán)色差異（如高濃度孔深藍(lán)色、低濃度孔淺藍(lán)色）時(shí)，即可加入終止液；若儀器含 600nm 波長(zhǎng)，可在終止前檢測(cè)高濃度標(biāo)準(zhǔn)品的 OD600nm 值，當(dāng)達(dá)到 1.0 左右時(shí)終止，此時(shí)顯色反應(yīng)處于線性期，終止后顏色由藍(lán)變黃，信號(hào)強(qiáng)度約增強(qiáng) 3 倍，易形成 S 型曲線。在圖形調(diào)整上，若標(biāo)曲擬合后未呈現(xiàn)明顯 S 型，可通過(guò)調(diào)整坐標(biāo)軸范圍優(yōu)化—如將縱軸（OD 值）范圍設(shè)為 0-2.5，橫軸（熱原濃度）設(shè)為對(duì)數(shù)坐標(biāo)，突出低濃度區(qū)的拐點(diǎn)與高濃度區(qū)的平臺(tái)區(qū)，使曲線更接近 S 型。此外，標(biāo)曲配制需確保濃度點(diǎn)單獨(dú)配制（非連續(xù)稀釋），避免高濃度標(biāo)準(zhǔn)品污染低濃度點(diǎn)，導(dǎo)致低濃度區(qū)信號(hào)異常升高，破壞 S 型曲線形態(tài)。通過(guò)以上方法，可有效提升 S 型標(biāo)曲的成功率，保障熱原定量的準(zhǔn)確性。

湖州申科生物熱原檢測(cè)（MAT法） 試劑盒在靈敏度、穩(wěn)定性與適用性上表現(xiàn)突出，關(guān)鍵性能參數(shù)符合藥典要求：標(biāo)曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，相關(guān)系數(shù) R2≥0.98，定量限 0.025EU/mL，檢測(cè)限（LOD）0.0125EU/mL，批間精密度 CV≤25%，可準(zhǔn)確捕捉微量熱原。其優(yōu)勢(shì)在于特定的單核細(xì)胞系 —— 與依賴供體血液的 PBMC 細(xì)胞不同，申科 MAT 細(xì)胞系來(lái)源清晰可溯源，無(wú)需倫理審批與血站合作，規(guī)避供體差異導(dǎo)致的檢測(cè)波動(dòng)。對(duì)比同類型產(chǎn)品（如國(guó)外廠家 PBMC 細(xì)胞），申科細(xì)胞系的標(biāo)曲各濃度點(diǎn) CV 更低（ 低至3.6%）、相對(duì)偏差更小（ 12.31%），線性 R2 達(dá) 1.000，穩(wěn)定性更優(yōu)。此外，細(xì)胞凍存液組分經(jīng)優(yōu)化，復(fù)蘇后活率高，無(wú)需額外調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)即可直接與供試品共孵育，操作便捷；且適配任何具備 450nm 波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，無(wú)需專門的設(shè)備，降低實(shí)驗(yàn)室投入成本。

PyroSHENTEK^®熱原檢測(cè)試劑盒（MAT法）已完成 25 個(gè)品種樣品的檢測(cè)驗(yàn)證，覆蓋單抗類、疫苗類、基因工程類、血液制品類、生化藥品類與注射液，結(jié)果顯示其適配性范圍廣但需關(guān)注部分樣品的干擾。疫苗類（如麻腮風(fēng)聯(lián)合減毒活疫苗、人用狂犬病疫苗）、基因工程類（重組人促紅素、干擾素 α-2b）、血液制品類（人血白蛋白、凝血因子 Ⅷ）與注射液（生理鹽水、琥珀酰明膠）的加標(biāo)回收率均在 50%-200% 范圍內(nèi)，無(wú)明顯干擾，檢測(cè)結(jié)果可靠。單抗類（如貝伐珠單抗、阿達(dá)木單抗）、中藥注射液等樣品雖存在不同程度的抑制作用，需通過(guò)提高稀釋倍數(shù)（如稀釋至 MVD 上限）、超聲處理或添加中和劑消除抑制，優(yōu)化后回收率均可達(dá)標(biāo)。此外，MAT 法可有效檢測(cè)非內(nèi)毒素?zé)嵩鐚?duì)貝伐珠單抗注射液中添加的酵母多糖（Zymosan，200μg/mL）、脂磷壁酸（LTA，10μg/mL），回收率分別達(dá) 113%、66.8%，證明其可解決傳統(tǒng)鱟試劑漏檢非內(nèi)毒素?zé)嵩膯?wèn)題，尤其適用于高風(fēng)險(xiǎn)生物制品的熱原防控。

PyroSHENTEK^®熱原檢測(cè)試劑盒依據(jù) ICH Q2 (R2)、《中國(guó)藥典》（如通則 9301）及歐洲藥典（EP 2.6.30）要求，完成了線性、范圍、定量限、準(zhǔn)確度、精密度、耐用性等全維度性能驗(yàn)證。線性方面，0.0125-1.0EU/mL范圍內(nèi)擬合良好，R2≥0.98；準(zhǔn)確度通過(guò)加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，不同樣品基質(zhì)（如生物制品、化學(xué)制藥原料）的回收率均落在 50%-200% 區(qū)間；精密度表現(xiàn)優(yōu)異，批內(nèi)與批間 CV 均≤15%，且無(wú)論是 3 復(fù)孔還是 4 復(fù)孔檢測(cè)均能達(dá)標(biāo)。此外，試劑盒使用中國(guó)藥典推薦的 MAT 特定標(biāo)準(zhǔn)品，可直接用于國(guó)內(nèi)外申報(bào)，契合全球 “3R 原則” 監(jiān)管導(dǎo)向—尤其適配《歐洲藥典》刪除家兔法、《美國(guó)藥典》鼓勵(lì) MAT 替代等新法規(guī)趨勢(shì)，為企業(yè)應(yīng)對(duì)不同地區(qū)的熱原檢測(cè)合規(guī)要求提供有力支持。

單核細(xì)胞活化反應(yīng)測(cè)定（MAT）是近年來(lái)熱原檢測(cè)領(lǐng)域的突破性技術(shù)，其原理基于人體免疫系統(tǒng)對(duì)熱原的天然應(yīng)答機(jī)制：人源單核細(xì)胞（如 THP-1 細(xì)胞系或新鮮人全血單核細(xì)胞）在熱原刺激下，會(huì)活化胞內(nèi)炎癥信號(hào)通路，釋放 IL-6、TNF-α 等促炎細(xì)胞因子，通過(guò) ELISA 檢測(cè)細(xì)胞因子的濃度，即可間接反映樣品中熱原的總量與活性。與傳統(tǒng)檢測(cè)方法相比，MAT 法具備三大不可替代的優(yōu)勢(shì)：一是廣譜性，可同時(shí)檢測(cè)細(xì)菌內(nèi)毒素、病毒、真菌毒素、支原體等所有類型熱原，填補(bǔ)了鱟試驗(yàn)法只能檢測(cè)內(nèi)毒素的 “非內(nèi)毒素?zé)嵩^(qū)”，尤其適用于疫苗、基因治療產(chǎn)品等易受多種熱原污染的高風(fēng)險(xiǎn)產(chǎn)品；二是人源相關(guān)性，采用與人體同源的細(xì)胞模型，檢測(cè)結(jié)果更貼近臨床實(shí)際熱原反應(yīng)，避免家兔試驗(yàn)中動(dòng)物種屬差異導(dǎo)致的誤判；三是高靈敏度，對(duì)細(xì)菌內(nèi)毒素的檢測(cè)限可達(dá) 0.0125EU/mL，對(duì)非內(nèi)毒素?zé)嵩ㄈ缃湍付嗵恰⑾俨《荆┑臋z測(cè)限低至 ng/pg 級(jí)，滿足低限值產(chǎn)品的質(zhì)控需求。