陜西熱原檢測MAT法

來源：發(fā)布時間：2025-10-04

一次合格的 MAT 法熱原檢測，需同時滿足 “合格標曲” 與 “合格樣品檢測值及回收率” 兩大關鍵條件。合格標曲需具備四要素：一是良好線性，采用 4-Parameter Logistic 擬合，R2 需接近 1.0，避免線性不佳導致定量偏差；二是良好信號值，各濃度點 OD 值需呈梯度變化，高濃度點 OD 值需足夠（如上限濃度 OD600 達 1.0 左右），信號過低會影響靈敏度；三是良好 CV，復孔間 CV 需控制在合理范圍（定量限內(nèi)≤25%、定量上下限≤30%），確保重復性；四是良好背景值，陰性對照 OD 值需低于標曲下限濃度點 10%，排除外源污染。合格樣品檢測值則需滿足加標回收率在 50%-200%，例如文檔中某樣品 10 倍稀釋回收率 41.3%（不合格），20 倍 71.3%（接近合格），40 倍 97.7%（合格），需在 MVD 范圍內(nèi)調(diào)整稀釋倍數(shù)，同時樣品熱原濃度需低于規(guī)定限值（CLC），方可判定樣品符合要求。

MAT 法干擾試驗需設 3 個樣品濃度梯度（A、2A、4A 倍），均不超過MVD且加標回收合格。陜西熱原檢測MAT法

中國藥典與歐洲藥典對 MAT 熱原檢測的細胞類型及復孔數(shù)有明確要求，且存在細節(jié)差異。細胞類型上，兩者均認可人全血、PBMC（外周血單個核細胞，至少 4 個供體，歐洲藥典建議 8 個供體），中國藥典明確將單核細胞系納入，歐洲藥典則要求單核細胞系需做支原體污染檢測、細胞鑒別等；檢測方法均為 “熱原刺激細胞 + ELISA 檢測 IL-6/IL-1β/TNF-α”。復孔數(shù)方面，兩者均規(guī)定平行孔≥4、濃度點≥4，中國藥典額外要求標曲 r≥0.90，主要目的是通過多重復孔抵消 PBMC 的不穩(wěn)定性，確保熱原檢測結果準確可靠。

高效熱原檢測常見問題分析湖州申科MAT試劑盒適用于生物制品、化學制藥、原料藥、化妝品、醫(yī)療器械的熱原檢測。

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒（貨號 1502100，規(guī)格 96 測試 / 盒）優(yōu)勢在于搭載 MAT 特定單核細胞系，細胞表面表達多種 Toll 樣受體（TLR），可響應不同類型熱原。該細胞系來源清晰、可溯源，均一性強且無供體依賴，有效規(guī)避了傳統(tǒng) PBMC 因供體差異導致的結果波動，同時安全風險低，無需擔憂外源因子污染。試劑盒采用 “標準化單核細胞 + ELISA 檢測” 一體化體系，通過嚴格的細胞質(zhì)量控制（如凍存復融后活率達標），確保每次檢測的細胞狀態(tài)一致；搭配預包被 IL-6 抗體的酶標板與配套試劑，進一步減少體系誤差。從標曲數(shù)據(jù)來看，其擬合采用 4-Parameter Logistic 模型，R2 達 1.000，EC50 為 0.119EU/mL，參數(shù)置信區(qū)間穩(wěn)定，復孔結果重復性優(yōu)異，能為熱原定量提供準確如一的數(shù)據(jù)支撐，避免因體系不穩(wěn)定導致的檢測偏差。

PBMC（外周血單個核細胞）的復雜制備流程嚴重制約熱原檢測效率。首先，血源獲取受獻血者數(shù)量、時間及采集血液政策限制，無法按需即時獲取；其次，需嚴格執(zhí)行 EP2.6.30 規(guī)定的標志物檢測，增加前期準備時間；再進行采集血液、分離單核細胞、凍存等環(huán)節(jié)需全程無菌操作，步驟繁瑣且易引入污染風險。相比之下，單核細胞系可工業(yè)化培養(yǎng)，制備流程簡單可控，能快速提供合格細胞，避免因 PBMC 制備延誤熱原檢測進度，更適配批量樣品的高效質(zhì)控。家兔法是熱原檢測 “金標準”，但操作繁瑣、耗時且需動物設施，存在明顯局限。

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒以 “簡化流程、提升效率” 為設計理念，采用即用型細胞，凍存細胞無需離心復蘇培養(yǎng)，復融后可直接與供試品混合共孵育，大幅節(jié)省傳統(tǒng)細胞預處理（如調(diào)整細胞狀態(tài)、鋪板培養(yǎng)）的時間成本。實驗流程清晰可控：只需按要求制備待測供試品與內(nèi)毒素工作標準品，各取對應體積加入細胞懸液（每孔加樣量明確），經(jīng) 37℃、5% CO?孵育 24 小時后，離心收集上清并通過 ELISA 法檢測 IL-6 含量，全程可在 24 小時內(nèi)獲得穩(wěn)定可靠的檢測結果。這種便捷性尤其適配實驗室高通量檢測需求，減少人員操作步驟的同時，降低了因復雜操作引入的誤差風險，兼顧效率與準確性。

2023年PRIMM研究：聚山梨酯80 mRNA疫苗中，家兔法熱原檢查因LER漏檢41%，MAT回收率98%+。上海生物制品熱原檢測方法驗證

MAT 熱原檢測中細胞活性影響巨大，活率需達一定標準保證檢測效果。陜西熱原檢測MAT法

MAT法熱原檢測中，標曲信號值偏低或線性不佳是常見問題，需按細胞、標準品、ELISA 檢測三環(huán)節(jié)排查解決。細胞相關問題中，細胞復蘇后若未充分混勻?qū)е陆Y團，種板后細胞分布不均，會使局部信號弱，需振蕩細胞懸液后再種板；細胞活性差或處理時間超半小時，會降低炎癥因子分泌，需嚴格按說明書操作并縮短處理時間；孵育未達 37℃、5% CO?條件，細胞活化不足，需確保培養(yǎng)箱參數(shù)穩(wěn)定；細胞懸液若接觸外源熱原，會引發(fā)非特異性反應，操作時需遠離熱原污染源。標準品問題方面，配制稀釋錯誤會直接導致濃度不準，需核對稀釋步驟；振蕩時間不足（未按說明書要求）會使內(nèi)毒素分散不均，需確保振蕩充分且 4 小時內(nèi)使用；標準品降解會導致效價下降，需按推薦條件保存（如 - 20℃冷凍）。ELISA 檢測環(huán)節(jié)，孵育時間短或振蕩速度慢會影響抗體結合，可適當延長孵育或提高振蕩速度；TMB 顯色不足（<3 分鐘）會導致信號低，需顯色 3-10 分鐘，待高濃度點 OD600 達 1.0 時加終止液。

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標簽：內(nèi)毒素檢測宿主細胞殘留DNA檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測熱原檢測

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