江蘇高效熱原檢測法規要求

來源：發布時間：2025-10-09

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒突破傳統檢測方法局限，不僅能檢測革蘭氏陰性菌來源的內毒素，還可準確識別革蘭氏陽性菌（脂磷壁酸 LTA）、病毒、真菌等產生的非內毒素熱原（NEP），契合熱原檢測 “全風險覆蓋” 的法規需求。其定量限低至 0.025EU/mL，實驗數據顯示，對 Flagellin、LTA、Resiquimod、Poly-IC 等多種 NEP 均能有效檢出，且加標回收率穩定在 50%-200% 合格范圍（如貝伐珠單抗注射液中 LTA 加標回收率 66.8%、Zysoman 加標回收率 113%）。此外，試劑盒聯合了國內相關機構完成室間驗證，與傳統家兔熱原試驗（RPT）橋接結果高度一致 —— 如人用狂犬病疫苗（Vero 細胞）中 LPS 加標回收率 152.1%、人血白蛋白中 LPS 加標回收率 71.6%，檢測數據科學性符合國際法規要求，助力企業無縫銜接中美歐等地申報標準。

熱原檢測MAT法可在96孔板中批量檢測，單批次實驗1.5天即可放行，家兔法需3-7天。江蘇高效熱原檢測法規要求

MAT 試劑盒配套的即用型細胞存在明確的傳代限制，且商業化傳代需獲得授權，關鍵是保障細胞質量與檢測可靠性。首先，即用型細胞經特殊工藝優化，已處于較好的活性與熱原響應狀態，不適合傳代，傳代后細胞會出現 TLR 受體表達下降、炎癥因子分泌減少等問題，導致熱原檢測靈敏度降低，如 HL-60 細胞傳代超過 5 代后，IL-6 分泌量下降 30%，無法滿足檢測要求。其次，若用戶需將即用型細胞用于商業化生產（如大規模檢測），需獲得湖州申科授權，包括用戶資質審核、技術培訓、傳代方案驗證，確保用戶具備細胞培養與質量控制能力，避免未經授權傳代導致細胞特性改變，影響檢測結果一致性。此外，參考文獻數據，即使是可傳代的單核細胞系，使用代次也不超過 20 代，超過后代次細胞穩定性差，因此即用型細胞設計為 “一次性使用”，從源頭避免傳代帶來的風險。用戶需嚴格遵守傳代限制，若需長期使用，建議定期采購新批次試劑盒，確保細胞質量。

湖南熱原檢測操作步驟MAT 法檢測革蘭氏陽性菌注射劑，需排查非內毒素熱原（如 LTA），避免只測內毒素漏檢。

MAT 法熱原檢測中，細胞傳代的代次控制是保障檢測穩定性的關鍵，需結合細胞特性與文獻數據制定標準。參考行業文獻，單核細胞系（如 HL-60、THP1）的使用代次通常不超過 20 代，代次過高會導致細胞生物學特性改變：一是 TLR 受體表達下降，如 TLR4 表達量在 20 代后下降 40%，導致內毒素檢測靈敏度降低；二是細胞倍增時間延長，從 24 小時延長至 36 小時，影響共培養時長的準確性；三是炎癥因子分泌減少，IL-6 分泌量在 20 代后下降 35%，導致熱原濃度低估。申科對配套的 HL-60 細胞系進行代次穩定性驗證，結果顯示：1-15 代細胞的熱原響應性一致（加標回收率 85%-125%），16-20 代回收率波動至 70%-130%，21 代后回收率 < 70%，因此建議控制在 1-15 代使用。實驗室需建立細胞代次記錄制度，每傳代 1 次記錄代次，達到 15 代后及時更換新批次細胞，并驗證新批次細胞與舊批次的一致性（如檢測同一樣品，結果偏差≤20%），確保不同代次細胞的檢測結果穩定。

PyroSHENTEK^®熱原檢測試劑盒依據 ICH Q2 (R2)、《中國藥典》（如通則 9301）及歐洲藥典（EP 2.6.30）要求，完成了線性、范圍、定量限、準確度、精密度、耐用性等全維度性能驗證。線性方面，0.0125-1.0EU/mL范圍內擬合良好，R2≥0.98；準確度通過加標回收實驗驗證，不同樣品基質（如生物制品、化學制藥原料）的回收率均落在 50%-200% 區間；精密度表現優異，批內與批間 CV 均≤15%，且無論是 3 復孔還是 4 復孔檢測均能達標。此外，試劑盒使用中國藥典推薦的 MAT 特定標準品，可直接用于國內外申報，契合全球 “3R 原則” 監管導向—尤其適配《歐洲藥典》刪除家兔法、《美國藥典》鼓勵 MAT 替代等新法規趨勢，為企業應對不同地區的熱原檢測合規要求提供有力支持。

中國藥典規定 MAT 法標曲需 4 個平行孔、濃度點≥4，推薦四參數擬合，r≥0.90。

在 MAT 法熱原檢測中，PBMC（外周血單核細胞）與單核細胞系各有優劣，單核細胞系更適合標準化檢測。PBMC 的優勢在于免疫細胞成分豐富（含單核細胞、淋巴細胞等），對熱原反應敏感，靈敏度相對較高；但局限同樣明顯 ——PBMC 需從不同供體獲取，供體免疫狀態差異會導致檢測結果不穩定，且無法長期保存，難以建立標準化方法學。單核細胞系（如 HL-60、MM6、THP1）則克服了 PBMC 的局限：細胞來源穩定（可批量培養），TLR 受體表達覆蓋主要亞型（如 HL-60 表達 TLR1-TLR9），對熱原反應重復性好，更適合商業化試劑盒與法規檢測。不同單核細胞系性能也有差異：MM6/IL-6 法檢測限約 0.05EU/mL，THP1/TNF-α 法因 TNF-α 為一級免疫效應物檢測限更低，但 TNF-α 穩定性差；HL-60/IL-6 法檢測限與穩定性均優于前兩者，成為主流選擇。湖州申科生物MAT試劑盒選用 HL-60 細胞系，正是基于其優異的穩定性與熱原響應適配多場景，確保不同批次檢測結果一致。

PyroSHENTEK熱原檢測試劑盒采用“單核細胞+ELISA”標準化體系，檢測結果穩定、重復性好，數據準確。上海重組蛋白熱原檢測方法驗證

熱原檢測采用人外周血單核細胞（PBMC），優勢是天然受體譜系完整，但供體差異導致變異系數（CV）高達25%。江蘇高效熱原檢測法規要求

熱原檢測MAT法的法規地位持續提升，已成為多國藥典認可的熱原檢測替代方法。歐洲藥典（EP）是推動 MAT 應用的關鍵力量：通則 2.6.30 明確 MAT 可替代家兔熱原試驗（RPT），且能同時檢測內毒素與非內毒素熱原；2024 年歐洲藥典委員會批準刪除所有條款中的家兔法，修訂文本將于 2025 年7月1日生效，強制鼓勵使用 MAT 等體外替代方法。美國藥典（USP）<151> 規定，經驗證的體外熱原試驗（如 MAT）可替代家兔法，且需依據 USP<1225>開展驗證；FDA 行業指南進一步明確 MAT 的合規性。中國藥典 2020 年版通則 9301 將 MAT 列為熱原檢查的補充方法，雖暫未替代家兔法，但明確其適用于復雜基質樣品的全熱原篩查。此外，ISO 10993-1、ICCVAM 等國際標準也優先推薦體外熱原檢測模型，全球法規協同推動 MAT 成為熱原檢測的主流技術。

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標簽：宿主細胞殘留DNA檢測熱原檢測內毒素檢測宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測

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