技術實現要素:本發明的目的在于提供利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用,采用該構建方法可以得到視網膜色素變性疾病模型,該模型可表現出視網膜色素變性性疾病特征,該模型可用于視網膜色素變性性疾病的研究,可以幫助闡明rp的發病過程及機制,并為該疾病的或預防提供新的靶標。本發明是這樣實現的:方面,本發明實施例提供了一種利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法,其包括:敲除目標動物視網膜前體細胞中的基因組中的gm20541基因。人類疾病的動物模型是指各種醫學科學研究中建立的具有人類疾病模擬表現的動物。湖南豚鼠動物模型構建
本發明涉及醫學工程技術領域,具體而言,涉及一種利用gm20541基因構建視網膜色素變性疾病模型的方法和應用。背景技術:視網膜色素變性(retinitispigmentosa,rp)是一組視網膜光感受器異常導致的遺傳性致盲眼底病,在全世界的發病率約為1/3000~1/4000,而在中國人群的發病率可達1/3500,由于我國人口眾多,rp患者可達三十萬之眾,給家庭和社會帶來了沉重的負擔。目前針對rp的診斷和面臨許多困難,尚無有效的手段,這主要歸因于其在臨床表型和遺傳上具有高度的異質性,針對其病理機制系統研究不足。典型的rp患者早由于視桿細胞功能缺陷而出現夜盲和視野狹窄,逐步發展為管狀視野,直至失明;眼底檢查可見視網膜色素沉著。在病理學方面,典型的rp主要影響視桿細胞,造成視桿細胞死亡并繼發視錐細胞死亡,主要表現為光感受器受損、變性,視網膜外核層逐漸變薄直至消失,視網膜外網層及其他相關細胞層出現相應病理改變。此外,由于rp在臨床表型和遺傳模式上均具有高度的異質性,導致許多的rp致病機制尚不清楚,這為rp疾病的臨床診斷帶來極大困難,因此針對rp疾病的致病機制研究迫在眉睫。而目前,缺乏相應的rp疾病模型。湖南乳鼠動物模型實驗室(arteriosclerosis,AS)是一種緩慢進行性疾病,嚴重影響人類健康。
znf124是一種編碼鋅指蛋白的新基因。鋅指蛋白是一類具有手指狀結構域的轉錄因子,對基因調控起重要的作用。znf124蛋白可穿過核孔進入核內,作為轉錄因子調控其他基因的表達。目前針對znf124蛋白功能的研究報道并不多,對其功能也知之甚少,znf124與一種先天性系統發育疾病dandy-walker復合征(dandy-walkercomplex,dwc)相關。此外,znf124被認為參與了前體生長因子(vegf)對人造血細胞凋亡的抑制作用,表明znf124在人體生命活動中承擔有重要功能。發明人的另一研究表明,znf124基因突變與rp有關,對探索rp的致病機制有極大幫助。因此,深入研究znf124對視網膜色素變性疾病的及病因探討潛力巨大。
把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話,要用TBST泡洗三遍再轉移至一抗溶液中,BSA封閉的可以直接轉移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個長方形,這里的寬與長相對應)不大于8毫米,我習慣置于15毫升離心管中孵育,兩條膜"背對背"式放置于一個管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米,就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過夜,一般是12-18個小時,注意放置水平,用搖床。內參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現條帶連在一起的情況,這時可以縮短孵育時間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室溫一個小時足矣。這步要注意的是建議用5%BSA或者脫脂奶粉稀釋二抗,這樣背景會干凈許多。也要注意膜的蛋白面要充分接觸二抗溶液,我們一般一條膜一個槽地孵。2、顯影這一步有個細節可能有些同學沒注意到,就是ECL發光液要與HRP反應一分鐘后顯影效果才會更好,還有要注意的是顯影液要均勻覆蓋,一般第二次顯影(加新的顯影液)比一次好看。大鼠面癱模型的建立。
IgA腎病小鼠模型【目的】建立IgA腎病小鼠模型,并觀察模型的生化及病理指標特點。【材料】1、酸化水:鹽酸調滅菌水;2、蓖麻油+CCl4:5:1配制;3、LPS:;4、血清白蛋白BSA:800mg/kg用量,滅菌水配制;【方法】小鼠BSA+CCl4+脂多糖LPS誘導法1、20g小鼠牛血清白蛋白BSA(800mg/kg)隔天灌胃1次,配制160mg/ml,灌胃100ul/只,持續8周;2、同時皮下注射蓖麻油和CCl4(5:1),1次/周,持續8周;3、分別于第6、8周以()尾靜脈注射LPS,1次/周;4、每兩周取24h尿液一次觀察尿蛋白及紅細胞;5、每日觀察精神、飲食、大小便,第9周處死,取血和腎、肝做相應檢查;6、取尿液后2000r/min離心10min,取上清用全自動生化儀檢測尿蛋白肌酐比值,鏡下觀察尿沉渣中有無紅細胞。裸鼠皮下成瘤:前肢近腋后皮下注射細胞懸液; 裸鼠原位瘤:胰腺成瘤;尾靜脈注射成瘤。高脂高糖動物模型
卵巢切除致骨質疏松大鼠模型。湖南豚鼠動物模型構建
導師給我們上的堂課往往就是交代我們要詳細記好實驗記錄,只要是和實驗相關的,無論是照片,還是文字,必須要及時事無巨細地詳細記錄。并且要備份好每一份實驗記錄。我個人一般喜歡每天及時地記在「科研實驗記錄本」上面,然后拍照掃描成電子版儲存在電腦和云端。時間規劃首先,個人是不贊同每天24小時泡在實驗室的,高效率是關鍵。建議提前一天規劃好第二天需要做的事情,按照代辦事項的格式逐條列出,哪一個時間段需要做什么事情?這樣的好處有兩點,一個是自己提前把時間預約好,可以留出足夠的時間休息和娛樂;另一個是在執行計劃的時候往往會有一種時間緊迫感,辦事起來往往更高效且不會遺漏。總之,預實驗就是迷你版正式實驗,希望小伙伴們在進行預實驗的時候一定要盡可能地準備周全,這樣才能快的推進正式實驗。湖南豚鼠動物模型構建