凍存過程中保護劑的選用、細胞密度、降溫速度及復蘇時溫度、融化速度等都對細胞活力有影響。[4]細胞培養具體步驟編輯一、細胞復蘇將凍存細胞從液氮中取出后，在37℃水浴鍋內不斷搖動促進其融化。移入15ml離心管中，加入10ml預熱的DMEM完全培養基，輕輕吹勻，離心，2000rpmX2min，棄上清液。加入10mlDMEM培養基清洗，棄上清液。加入10mlDMEM完全培養基，輕輕吹打，接種于10cm盤中，在含5%CO2的細胞培養箱中培養。二、細胞傳代細胞密度達到80%~90%時．去培養基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含0．25%EDTA的胰蛋白酶，放入細胞培養箱3min。加人1mlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。再加入10mlPBS（經高壓滅菌，保存于40C），吹勻，吸取10微升進行計數，按照1×105/盤接種，在含5%CO2的細胞培養箱繼續培養。三、細胞凍存細胞密度達到80%～90%時，去培養基，10mlPBS清洗2次。加入3ml含，放入細胞培養箱3min。加入lmlDMEM完全培養基終止胰酶消化，轉移至15ml離心管。加入10mlPBS清洗細胞培養盤，轉移至15ml離心管，2000rpmX2min，棄上清液。加入1ml凍存液（90%血清，10%DMSO），放入凍存盒內。2~4h后輕輕翻轉培養皿,補足培液使肌小粒浸浴于培養液中，3d換液一次,待細胞長滿即可傳代。西藏血液原代細胞實驗室

原代細胞的優勢與不足細胞培養很好的補充了體內實驗的不足，它讓細胞功能和進程的研究更具可操作性。細胞系的一個缺點是它們往往與原始的組織有不一樣的遺傳和表型。相比之下，原代細胞保持了細胞在體內的許多重要標志和功能。原代細胞的生長：雖然原代細胞有諸多優點，但是獲得高純度的原代細胞是一個非常艱巨的過程。比起細胞系，原代細胞可謂是極其敏感，需要額外添加經典培養基所沒有的營養。原代細胞要在專為每種細胞定制的特殊培養液中存活和生長。例如內皮細胞與上皮細胞或神經元營養需求就大為不同。因此需要特殊培養基。傳統細胞培養基靠血清提供生長因子、脂類和其他未知成分供細胞生長。但高血清會導致原代細胞分化或助長成纖維細胞等污染。此外，使用血清還會顧慮費用增高和批次差異等問題。使用低血清或無血清的特殊成分培養基不僅可以避開這些問題，還能更好的促進原代細胞的生長。另外，將原代細胞接種在生理親和性的基板上可以顯著提高細胞貼壁率、生長狀態和純度。基因表達分析：基因表達直接影響細胞功能，基因表達分析對研究原代細胞起重要作用。傳統的報告基因檢測和cDNA芯片方法往往需要轉染或大量高質量RNA。但是原代細胞是出了名的難轉染。吉林乳鼠原代細胞實驗室采用波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色鑒定，結果顯示波形蛋白（Vimentin）免疫熒光染色鑒定呈現陽性。

本實用新型涉及細胞培養箱領域，尤其涉及的是一種新型原代細胞培養箱。背景技術：現有技術中，原代培養，是指由體內取出組織或細胞進行的培養，也叫初代培養。原代培養離體時間短，遺傳性狀和體內細胞相似，適于做細胞形態、功能和分化等研究。較為嚴格地說是指成功傳代之前的培養，此時的細胞保持原有細胞的基本性質，如果是正常細胞，仍然保留二倍體數。但實際上，通常把代至第十代以內的培養細胞統稱為原代細胞培養。利用原代培養，可對細胞培養進行藥物的篩選，根據細胞對加入的化療藥物的敏感性來幫助選擇的化療方案，有可能起到增強療效、降低副作用的作用。而實驗室在進行原代細胞培養過程中，為得到更多的細胞進行篩查，往往需要同時對大量的細胞進行培養，而市面上單層或雙層設計的細胞培養箱已難以滿足實驗者的需求，另外市面上也有一些原代細胞培養箱，但其儲藏空間設計不合理，空間利用率低，在存放大量的細胞培養皿時，其占地面積也大，不方便實驗者存放。同時，無毒和無菌是體外培養細胞的首要條件，培養皿作為用于細胞培養的主要實驗室器皿，常存儲于細胞培養箱內進行貯藏培養，市場上的大型原代細胞培養箱由于空間設計過大。

細胞之間的促生長作用很小，也很難使細胞適應從體內的組織環境到被分散后進入生存環境的變化過程。如果接種的細胞密度過大，會導致營養物質供應不足，代謝廢物積累較快需要經常換液和傳代。2）適當增大原代培養接種的細胞密度，給培養的細胞提供更多的類似于在體內時細胞之間的相互作用，會極大提高原代培養的細胞在體外存活率。待細胞適應體外環境后進行傳代培養時再以較低的密度接種和培養。3）盡快使接種的細胞貼壁，是決定培養能否成功的關鍵。可以在接種后先將培養瓶置培養箱內培養3h到5h，待細胞貼壁后，再補足培養液繼續培養。3、懸浮型原代細胞1）必須保持細胞的懸浮狀態。可以通過增加培養液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態，如給培養液中加入低濃度的透明質酸復合物。在有攪拌裝置的培養器皿內加入培養液是，以5ml為限度，否則攪拌時會產生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則即可使培養液溢出又容易造成污染。如果培養液的量在5ml以下，可以采用旋轉瓶培養。給懸浮培養的細胞換液時要注意不要吸出細胞。2）能夠進行懸浮培養的細胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養成分消耗大，換液時間隔一般較短。骨髓間充質干細胞是骨髓基質干細胞，對骨髓中的造血干細胞（HSC）不*有機械支持作用。

是決定培養能否成功的關鍵。可以在接種后先將培養瓶置培養箱內培養3h到5h，待細胞貼壁后，再補足培養液繼續培養。3、懸浮型原代細胞1）必須保持細胞的懸浮狀態。可以通過增加培養液的黏度來幫助細胞呈懸浮狀態，如給培養液中加入低濃度的透明質酸復合物。在有攪拌裝置的培養器皿內加入培養液是，以5ml為限度，否則攪拌時會產生氣泡對細胞造成傷害。使用這種方式需注意勿使攪拌速度過快，否則即可使培養液溢出又容易造成污染。如果培養液的量在5ml以下，可以采用旋轉瓶培養。給懸浮培養的細胞換液時要注意不要吸出細胞。2）能夠進行懸浮培養的細胞，其生命力一般都比較旺盛，體外分裂增殖的速度較快，營養成分消耗大，換液時間隔一般較短。原代細胞培養問題解答1、原代細胞與細胞系有什么區別？根據傳統定義，收獲和接種的細胞被稱為原代細胞[Freshney,.(1987)..(NewYork,.)].這類細胞直接從組織分離，生命周期有限，經數次傳代后會逐漸停止生長。原代細胞在有限的生命周期內需掌握好細胞的生長空間，以保持細胞群中基因型和表型的一致性。細胞系是不斷生長、分化的細胞群，因其經過遺傳改造，致使其具有無限增長的潛能。體外生長的細胞系用于醫療或科研。但實際上。干細胞的誘導分化是干細胞功能學研究的主要途徑。西藏血液原代細胞實驗室

骨骼肌的一般形態特征肌細胞呈纖維狀，不分支，有明顯橫紋，核很多，且都位于細胞膜下方。西藏血液原代細胞實驗室

原標題：原代細胞培養難？有這一篇就夠了！導語原代細胞培養也叫初代培養，是建立細胞系的，其步驟包括取材→分離→培養和維持，給大家帶來原代細胞培養的一些技巧，希望大家能有所收獲！原代細胞培養原代細胞培養的應用1、為研究生物體細胞的生長、代謝、繁殖提供有力的手段；2、為傳代培養創造條件；3、服務于臨床實踐，用于藥物篩選等。原代細胞培養之取材取材作為原代細胞培養過程中的至關重要，以下幾種取材技術，你都用過哪些方法呢？兔髓核原代細胞培養之分離注意事項1、組織塊培養法1）組織塊接種后，在觀察和移動的過程中，注意不要引起液體的振蕩。要避免經常翻動和振動，否則組織塊不易附著于瓶壁上或附著后也會脫落飄起。2）加入的培養液不宜過多，避免浸泡的組織塊受輕微的波動而脫落下來。3）當細胞向外遷徙出來后要注意記錄并去除漂浮的組織塊和殘留的細胞，它們產生的有毒物質會影響原代細胞的生長。4）為促進組織塊盡快粘貼在培養瓶皿上，可以在種植前先將膠原薄層涂在培養瓶底壁上。2、貼壁型原代細胞1)原代培養的分離細胞在初次接觸體外環境時，它們之間會互相影響，在這些細胞之間能產生一些促生長的活性物質，使細胞彼此互相促進存活和生長。西藏血液原代細胞實驗室