METTL3能夠促進(jìn)肺腺細(xì)胞的生長(zhǎng)、生存和侵襲，但還不清楚它是否作為m6A調(diào)節(jié)器或效應(yīng)器發(fā)揮作用[25]。在急性髓細(xì)胞白血病（AML）患者中，m(6)A調(diào)控基因的突變或拷貝數(shù)變化與TP53突變存在密切聯(lián)系，且m(6)A調(diào)控基因的改變與AML不良預(yù)相關(guān)[26]。此外，F(xiàn)TO在AML中高表達(dá)，它通過降低mRNA轉(zhuǎn)錄本中的m(6)水平，調(diào)節(jié)ASB2和RARA等靶點(diǎn)的表達(dá)，增強(qiáng)了白血病基因介導(dǎo)的細(xì)胞轉(zhuǎn)化和白血病形成，并抑制全反式維甲酸(ATRA)誘導(dǎo)的AML細(xì)胞分化[27]。在脂肪形成過程中，F(xiàn)TO表達(dá)與m6A水平成負(fù)相關(guān)，促進(jìn)脂肪形成[3]。在膠質(zhì)細(xì)胞瘤樣細(xì)胞中，ALKBH5通過lncRNAFOXM1介導(dǎo)FOXM1基因pre-mRNA上的m6A修飾維持膠質(zhì)瘤細(xì)胞的成瘤性[28]。此外，甲基轉(zhuǎn)移酶METTL3或METTL14的敲除，能夠改變m6A的富集和ADAM19的表達(dá)，極大地促進(jìn)了膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)、自我更新和形成[29]。圖2m6ARNA修飾和介導(dǎo)的功能[30]m6A的研究方向主要是通過研究m6A修飾相關(guān)的甲基化、去甲基化酶和識(shí)別蛋白的功能，進(jìn)而研究m6A修飾的生物學(xué)功能和作用機(jī)制：一般通過敲除m6A酶分子，研究下游功能基因分子的表達(dá)和m6A甲基化情況，通過介導(dǎo)相關(guān)基因異常（可變剪切、穩(wěn)定性、翻譯、miRNA調(diào)控）影響細(xì)胞表型和功能特征。ELISA試劑盒在國(guó)內(nèi)有許多種叫法，例如：ELISA檢測(cè)試劑盒、ELISAKit。湖南組織科研技術(shù)服務(wù)外包

|基因組DNA擴(kuò)增|RNA擴(kuò)增|克隆與表達(dá)克隆基因|克隆試劑盒|克隆篩選|感受態(tài)細(xì)胞|突變轉(zhuǎn)染|轉(zhuǎn)化|體外轉(zhuǎn)錄/翻譯|其它表達(dá)分析Northern印跡分析|分支DNA和mRNA定量|差別基因表達(dá)|反義寡核苷酸|RACE試劑盒|SAGE試劑盒|其它抗體蛋白A,GPLUS|抑制/凋亡抗體|信號(hào)分子抗體結(jié)構(gòu)蛋白抗體|磷酸化特異抗體|融合蛋白tag抗體非哺乳動(dòng)物蛋白抗體|細(xì)胞周期蛋白抗體|轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白抗體|抗體制備佐劑|抗體片段|抗體同種型|抗體純化|抗體制備試劑盒|其它第二抗體westernblot二抗|免疫組化二抗|其它試劑盒ELISA試劑盒|免疫組化試劑盒|放射免疫試劑盒|westernblot試劑盒|流式細(xì)胞試劑盒|其它抗體相關(guān)siRNA|重組蛋白|白蛋白|試劑|其它分子生物學(xué)服務(wù)DNA提取/純化|DNA測(cè)序|第二代高通量測(cè)序|DNA保存和活化|基因合成|基因步行|基因組分析生物信息學(xué)|SNP檢測(cè)|實(shí)時(shí)定量PCR服務(wù)|文庫(kù)/載體構(gòu)建|寡核苷酸合成Oligo合成|實(shí)時(shí)PCROligo合成|其它細(xì)胞生物學(xué)服務(wù)細(xì)胞培養(yǎng)|流式細(xì)胞檢測(cè)|細(xì)胞毒性測(cè)試|細(xì)胞因子生物檢測(cè)|影像服務(wù)|篩選/發(fā)育服務(wù)|其它干細(xì)胞技術(shù)服務(wù)干細(xì)胞提取|干細(xì)胞鑒定|干細(xì)胞誘導(dǎo)分化|干細(xì)胞常規(guī)檢測(cè)|干細(xì)胞擴(kuò)增|干細(xì)胞轉(zhuǎn)基因|干細(xì)胞其他相關(guān)實(shí)驗(yàn)|微生物學(xué)服務(wù)微生物鑒定|抑菌作用測(cè)試|內(nèi)測(cè)試|內(nèi)。海南組織科研技術(shù)服務(wù)實(shí)驗(yàn)室分享的內(nèi)容能對(duì)大家有所幫助，想要了解更多，歡迎致電咨詢。

圖2MAZTER-Seq實(shí)驗(yàn)流程圖圖3MAZTER-MINE分析m6A示意圖接下來作者便是要驗(yàn)證這一新方法的可行性了。在酵母中敲除IME4的情況下，檢測(cè)到的剪切效率高于野生型（剪切效率高低m6A水平），m6A抗體富集后的樣品剪切效率也低于未富集的Input組。整體水平可靠，那檢測(cè)的特異性位點(diǎn)是否準(zhǔn)確呢？作者也將該方法檢測(cè)到的新甲基化位點(diǎn)使用放射標(biāo)記層析檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)預(yù)測(cè)的位點(diǎn)準(zhǔn)確存在而且與剪切效率相符合。如圖5所示。而圖6中，作者則是與m6A抗體IP的方法進(jìn)行了比較，也證實(shí)了這一方法的可行性。圖5MAZTER-Seq檢測(cè)結(jié)果驗(yàn)證圖6MAZTER-Seq與m6A-Seq比較分析此外，后文中作者也在大規(guī)模的CRISPR-Cas9改變m6A狀態(tài)和酵母減數(shù)分裂模型中檢測(cè)了MAZTER-Seq這一系統(tǒng)；并進(jìn)一步通過這一方法檢測(cè)了哺乳動(dòng)物不同細(xì)胞間m6A水平的保守性；也探究了去甲基化酶FTO對(duì)整體m6A甲基化水平的影響等。這里小編主要給大家分享這一新技術(shù)，其他部分暫不過多分析了。新的技術(shù)能拓展我們的研究?jī)?nèi)容；對(duì)于這一技術(shù)。

外泌體的功能外泌體可能作為細(xì)胞之間物質(zhì)和信號(hào)通訊的途徑，不同的細(xì)胞通過分泌攜帶不同組分的外泌體實(shí)現(xiàn)細(xì)胞間通訊，這些外泌體被受體細(xì)胞吸收，通過物質(zhì)交換或釋放內(nèi)含物實(shí)現(xiàn)物質(zhì)和信號(hào)的交流。外泌體與受體細(xì)胞的信息交流可能通過以下4種途徑實(shí)現(xiàn):外泌體表面膜蛋白質(zhì)被目的細(xì)胞表面的受體識(shí)別，從而靶細(xì)胞;外泌體在蛋白酶作用下產(chǎn)生的表面膜蛋白質(zhì)碎片可作為目的細(xì)胞表面受體的配體;外泌體脂膜可以與目的細(xì)胞膜融合，將蛋白質(zhì)和RNA等內(nèi)容物釋放進(jìn)去，此類膜融合可能改變靶細(xì)胞的一些膜特性，例如脂質(zhì)和膜蛋白質(zhì)的密度及種類;目的細(xì)胞通過胞吞的形式攝入外泌體經(jīng)由以上幾種途徑，外泌體將其攜帶的生物信息運(yùn)輸?shù)街苓叞屑?xì)胞或經(jīng)血液等體液運(yùn)輸而被遠(yuǎn)處組織細(xì)胞攝取，進(jìn)而影響目的細(xì)胞的基本功能和基因表達(dá)。幾乎所有的細(xì)胞都可以在自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生外泌體，不同的細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體具有不同的功能，這些外泌體參與了一系列生理和病理過程，如發(fā)生與發(fā)展、抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)、組織愈合等。此外，外泌體與疾病的研究表明：外泌體可能在代謝性疾病的出現(xiàn)以及心血管健康中發(fā)揮作用。動(dòng)物造模 | 膿毒癥造模方法之CLP造模法。

制作該模型的方法為大鼠腹腔麻醉消毒后選取腹部正中切口打開腹腔長(zhǎng)約2cm，尋找盲腸，小心分離其遠(yuǎn)端與大腸的系膜，在盲腸遠(yuǎn)端1/2處用無菌4號(hào)絲線緊緊結(jié)扎，并用無菌7號(hào)針頭在已結(jié)扎盲腸遠(yuǎn)端處貫通穿刺，然后把盲腸推回腹腔，關(guān)閉腹腔。影響因素多數(shù)研究一致認(rèn)為盲腸結(jié)扎位置是CLP模型中死亡率和疾病嚴(yán)重程度的主要決定因素。結(jié)論為：①結(jié)扎25%或以下的盲腸死亡率幾乎為零，為輕度膿毒癥；②結(jié)扎50%～60%的盲腸導(dǎo)致術(shù)后死亡率為60%，為中度膿毒癥；③結(jié)扎75%或以上的盲腸導(dǎo)致小鼠在術(shù)后2～3d內(nèi)全部死亡，為重度膿毒癥。而在不同程度膿毒癥中，死亡主要集中在初的48h內(nèi)。有研究通過改變盲腸結(jié)扎位置和穿刺針直徑來調(diào)節(jié)膿毒癥的嚴(yán)重程度，其中提到與結(jié)扎長(zhǎng)度小于1cm的小鼠相比，結(jié)扎長(zhǎng)度超過1cm的小鼠死亡率增加至100%；增加穿刺針的直徑也使得存活率從100%（22G針）降低至55%（19G針）。結(jié)論為：在上述兩個(gè)因素中，盲腸結(jié)扎位置比針頭大小影響更為。CLP誘導(dǎo)的膿毒癥術(shù)后6h即可出現(xiàn)菌血癥，術(shù)后約12h出現(xiàn)膿毒癥相關(guān)臨床癥狀，包括發(fā)熱、寒戰(zhàn)、毛發(fā)豎立、全身無力和活動(dòng)減少等，術(shù)后18h開始死亡。總之，在制作CLP模型時(shí)。常用于研究細(xì)胞的成瘤能力、細(xì)胞的轉(zhuǎn)移、細(xì)胞的耐藥和靶分子對(duì)腫瘤細(xì)胞的發(fā)展的影響等等。北京實(shí)驗(yàn)科研技術(shù)服務(wù)外包

實(shí)驗(yàn)技巧——做好細(xì)胞凍存，保證細(xì)胞質(zhì)量。湖南組織科研技術(shù)服務(wù)外包

把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時(shí)。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話，要用TBST泡洗三遍再轉(zhuǎn)移至一抗溶液中，BSA封閉的可以直接轉(zhuǎn)移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個(gè)長(zhǎng)方形，這里的寬與長(zhǎng)相對(duì)應(yīng))不大于8毫米，我習(xí)慣置于15毫升離心管中孵育，兩條膜"背對(duì)背"式放置于一個(gè)管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米，就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過夜，一般是12-18個(gè)小時(shí)，注意放置水平，用搖床。內(nèi)參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現(xiàn)條帶連在一起的情況，這時(shí)可以縮短孵育時(shí)間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室溫一個(gè)小時(shí)足矣。這步要注意的是建議用5%BSA或者脫脂奶粉稀釋二抗，這樣背景會(huì)干凈許多。也要注意膜的蛋白面要充分接觸二抗溶液，我們一般一條膜一個(gè)槽地孵。2、顯影這一步有個(gè)細(xì)節(jié)可能有些同學(xué)沒注意到，就是ECL發(fā)光液要與HRP反應(yīng)一分鐘后顯影效果才會(huì)更好，還有要注意的是顯影液要均勻覆蓋，一般第二次顯影(加新的顯影液)比一次好看。湖南組織科研技術(shù)服務(wù)外包