METTL3能夠促進肺腺細胞的生長、生存和侵襲，但還不清楚它是否作為m6A調節(jié)器或效應器發(fā)揮作用[25]。在急性髓細胞白血病（AML）患者中，m(6)A調控基因的突變或拷貝數(shù)變化與TP53突變存在密切聯(lián)系，且m(6)A調控基因的改變與AML不良預相關[26]。此外，F(xiàn)TO在AML中高表達，它通過降低mRNA轉錄本中的m(6)水平，調節(jié)ASB2和RARA等靶點的表達，增強了白血病基因介導的細胞轉化和白血病形成，并抑制全反式維甲酸(ATRA)誘導的AML細胞分化[27]。在脂肪形成過程中，F(xiàn)TO表達與m6A水平成負相關，促進脂肪形成[3]。在膠質細胞瘤樣細胞中，ALKBH5通過lncRNAFOXM1介導FOXM1基因pre-mRNA上的m6A修飾維持膠質瘤細胞的成瘤性[28]。此外，甲基轉移酶METTL3或METTL14的敲除，能夠改變m6A的富集和ADAM19的表達，極大地促進了膠質瘤細胞的生長、自我更新和形成[29]。圖2m6ARNA修飾和介導的功能[30]m6A的研究方向主要是通過研究m6A修飾相關的甲基化、去甲基化酶和識別蛋白的功能，進而研究m6A修飾的生物學功能和作用機制：一般通過敲除m6A酶分子，研究下游功能基因分子的表達和m6A甲基化情況，通過介導相關基因異常（可變剪切、穩(wěn)定性、翻譯、miRNA調控）影響細胞表型和功能特征。進行免疫沉淀法時，抗體需要和一個受質結合。大鼠科研技術服務外包

把膜先用TBST泡洗兩遍再用5%脫脂奶粉或者BSA室溫封閉1-2小時。注意一定要讓蛋白面充分接觸封閉液。2、孵一抗脫脂奶粉封閉的話，要用TBST泡洗三遍再轉移至一抗溶液中，BSA封閉的可以直接轉移至一抗中。如果膜的寬(膜是一個長方形，這里的寬與長相對應)不大于8毫米，我習慣置于15毫升離心管中孵育，兩條膜"背對背"式放置于一個管子里(3毫升液體即可)。如果大于8毫米，就用普通的5格的一抗孵育盒(4毫升即可)。4度過夜，一般是12-18個小時，注意放置水平，用搖床。內參等蛋白豐度很高的如果孵久了可能出現(xiàn)條帶連在一起的情況，這時可以縮短孵育時間或者降低一抗的濃度。六、孵二抗顯影1、孵二抗室溫一個小時足矣。這步要注意的是建議用5%BSA或者脫脂奶粉稀釋二抗，這樣背景會干凈許多。也要注意膜的蛋白面要充分接觸二抗溶液，我們一般一條膜一個槽地孵。2、顯影這一步有個細節(jié)可能有些同學沒注意到，就是ECL發(fā)光液要與HRP反應一分鐘后顯影效果才會更好，還有要注意的是顯影液要均勻覆蓋，一般第二次顯影(加新的顯影液)比一次好看。天津模式科研技術服務外包上海研錄生物醫(yī)藥為您提供一站式科研技術服務。

首先，預實驗必須要當做正式實驗來對待（態(tài)度要放端正，這是必須的）。預實驗的每一步都需要詳細規(guī)劃，多方籌謀。不論是實驗動物的選擇，還是檢測試劑的購買，都盡量和正式實驗統(tǒng)一標準。建議大家先把所有試劑和藥物購買完畢后，再去購買實驗動物。因為動物會長胖，長胖后給藥劑量就要增加，不僅多花錢，并且還容易影響實驗效果。筆者曾經(jīng)提前將實驗動物買回，但因為特殊原因沒能購買到造模藥物，**終只能忍痛割愛將動物贈送他人，白白虧了一筆血汗錢（那批老鼠在我這兒白吃白喝長得太胖，沒辦法用作造模）。動物及試劑購買首先需要考慮：實驗動物品種、體重、性別、周齡（通常根據(jù)既往文獻報道可以獲得答案）、數(shù)量（需要考慮到實驗有一定動物死亡率或者動物本身會打架互毆，因此需要提前購買足夠的動物）。動物購買的途徑、安置的地點，飲食管理（一般實驗室會有動物房，也可以從其他地方購買），動物免疫證明、倫理證明需要提前準備好。實驗相關的試劑和藥物：比如造模藥物和器械，動物干預所需藥物，陽***物選擇及購買（有些藥物購買很困難，必須通過特殊程序才能買到）。如果涉及到有創(chuàng)操作，要提前準備好**物（***建議提前購買），手術器械。

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常用于研究細胞的成瘤能力、細胞的轉移、細胞的耐藥和靶分子對腫瘤細胞的發(fā)展的影響等等。大鼠科研技術服務外包

常見的有理染色、WesternBlot、PCR等），實驗儀器是否需要預約使用。如果需要外送公司檢測，需要提前聯(lián)系好商家，以及了解清楚樣本如何獲取，如何運輸。飼養(yǎng)動物及干預動物購買后需要將時間節(jié)點提前規(guī)劃好，比如，周需要做什么？測量體重？觀察飲食？測量需要的指標？中間有無特殊操作？比如灌胃、測量體重、做CT檢測、取血？……第幾周取材？取材需要哪些？預實驗方案就要提前設計清楚以上內容。取材及樣品準備取材需要提前到動物房禁食、稱體重、取出動物、手術的、固定所需要的試劑和EP管，WesternBlot和PCR所需要的樣本儲存條件。比如凍存管、EP管，是否需要冰塊？是否需要液氮？取材當天需要多少人？是否需要請人幫忙？如果所需要取出的樣本較多，建議大家請人一起幫忙，流水線作業(yè)，這樣能節(jié)省時間，并且能保證樣品的質量。如果請人，每個人需要負責哪一板塊的工作，比如誰負責，誰負責取血液，誰負責取，誰負責拍照、誰負責儲存，都需要提前規(guī)劃交代清楚。實驗指標檢測如果是需要自己做的檢測，比如常見的WesternBlot、PCR，建議提前可以看看教程（無論是視頻還是貼吧，都要自己多方參考）。有了一定的理論基礎后，再向老師、師兄師姐學習經(jīng)驗和技術。大鼠科研技術服務外包