外泌體的精制磁珠法富集精制外泌體:300μg樣品(相當于300μg總蛋白)用含有5μg anti-CD63抗體的溶液稀釋,與protein A/G磁珠共孵育1hr,漂洗后用0.2M glycine洗脫。如果要先將抗體偶聯在磁珠上(以避免抗體洗脫下來對外泌體的干擾),請參考默克磁珠操作說明書。(Protocol C - Antibody Crosslinking Using Bis(sulfosuccinimidyl) suberate (BS3))。推薦使用試劑目錄號信息:cat# CBL553t 和cat# OP171以及LSKMAGAG02。 默克已經建立了基于“微濾+超濾”的外泌體制備操作標準,相較于需要昂貴的設備及繁瑣操作的超速密度梯度離心,用實驗室常見的工具解決外泌體制備的高大上問題,真是惠而不費,不亦樂乎?上海Millipore超濾濃縮管授權代理商!崇明區(qū)Merck離心濃縮管聯系人
Amicon? Pro純化超濾管簡明操作指南 親和純化 用于純化GST?Tag,His?Tag等重組表達蛋白及抗體,適合~0.5 mL裂解液操作 6次低速離心,總耗時~100分鐘(含65分鐘孵育時間) 1. 在Amicon? Pro上樣池中加入200μL親和純化樹脂(50%懸濁液)和1.5 mL漂洗緩沖液。 1,000×g離心1 min。 2. 加入0.5 mL樣品并與樹脂吸打混勻。孵育1 h,其間可溫和攪動促進結合。 3. 1,000×g離心1 min 以去除未結合雜質。 4. 加入1.5 mL漂洗緩沖液,1,000×g離心1 min。 外泌體用于細胞學或動物實驗前的無菌處理 已經經過上述方法制備的外泌體在進行細胞或動物實驗之前還需進行一步除菌過濾,這個時候考慮到得率,應該采用離心法處理,以減少過濾時的外泌體樣品損失。 超濾方法純化具體操作步驟舉例 Amicon? Ultra-15 超濾管 (10 kDa MWCO) 用Steriflip?真空抽濾對樣品進行澄清[目錄號SCGP00525; 0.22 μm Millipore Express PLUS (PES)膜]嘉定區(qū)離心濃縮管代理商那么超濾濃縮管施工的優(yōu)勢都有哪些呢?
蛋白如果濃縮過快或者過度濃縮都有可能引起蛋白沉淀。建議蛋白濃縮后的**終濃度不超過 20mg/ml。對于對濃縮速度敏感而容易沉淀的蛋白,建議的改進方法是: 1)離心力降為推薦離心力的30%-50% 2)改用截留分子量更大的超濾管(如原本選用10k,此時可以選擇30k) 3)在濃縮過程中取出超濾管,用***頭反復吹吸幾次后再繼續(xù)濃縮 Amicon? Ultra超濾膜中含有微量甘油。如果出現這種情況,請先用0.1 N NaOH清洗再離心。***用緩沖液或Milli-Q?水再次清洗后甩干。清洗后的濾膜應立即使用,如暫時不用,請保持潤濕狀態(tài),避免重新干燥。
對于慢***推薦Amicon? Ultra 100kDa; 對于腺***推薦Amicon? Ultra 50kDa。具體的操作步驟可以參考***濃縮純化試劑盒FTLV00003和FTAV00003的產品使用說明書。另提供AAV(腺相關***)的制備方法供參考。 去污劑因其獨特的性質,當濃度大于臨界微團濃度(Critical Micelle Concentration, CMC)時,去污劑分子會聚集形成微團而改變分子構象,這有可能會影響去污劑的去除效果。 Amicon? Ultra超濾膜含有微量甘油。如果此成分干擾分析,可用緩沖液或Milli-Q?水預清洗。如果干擾仍然存在,用0.1 N NaOH清洗,然后用緩沖液或Milli-Q?水再次清洗后甩干。超濾濃縮管的優(yōu)勢您了解多少呢?
樣品的澄清、過濾和除菌 Ultrafree?-MC和Ultrafree?-CL微濾管 Ultrafree?-MC(0.5mL)和Ultrafree?-CL(2mL)是一次性使用的微濾離心管,可以用于各種水性樣品和在某些溶劑中的樣品除顆粒物、除沉淀的處理。提供兩種體積及多種膜孔徑以及已經經過無菌處理的產品供選擇。Ultrafree?微濾離心管操作簡便、樣品回收率高且重復性很好,是蛋白和核酸樣品處理的理想選擇。 特點與優(yōu)點 有0.1-5.0μm五種膜孔徑供選擇 采用高回收率的親水Durapore? (PVDF)膜和親水PTFE膜 提供無菌包裝和非無菌包裝形式產品 過濾速度快,數據穩(wěn)定、重現性好 上樣體積為0.5mL (MC)或2mL (CL) 配合1.5mL離心管固定轉子(MC)或15mL離心管轉子使用 頂蓋顏色標識易于區(qū)分膜孔徑。你知道上海超濾濃縮管代理銷售哪家比較好嗎?嘉定區(qū)默克2ml超濾濃縮管咨詢問價
一個好的超濾濃縮管代理銷售需要具備哪些特點您了解嗎?崇明區(qū)Merck離心濃縮管聯系人
微濾中膜的孔徑大小通常以微米計,表示大于這一規(guī)格的顆粒將被膜截留。超濾膜根據 NMWL分級,有時也用截留分子量(MWCO)。NMWL表示大多數大于這個值的分子將在超濾時截留。一個確定NMWL的超濾膜應該截留至少90%以上的這個大小的球形分子。但為了保險起見,實踐中選擇的膜孔徑要小于目的分子。緩沖液置換時膜截留分子量應該充分大于流過的溶質。當膜材料相同時,孔徑減小 會增加排阻而減小濾過率。截留及產物回收的影響因素包括分子的形狀、帶電性質、樣品濃度及組成成分、操作條件、使用的設備構造等。因此常常發(fā)生同樣 NMWL 的膜對一定范圍內的不同分子截留效果有一定差異的情況。使用超濾方法進行樣品濃縮或除鹽時,需要謹慎地選擇合適的NMWL膜和設備。崇明區(qū)Merck離心濃縮管聯系人