湖州申科生物熱原檢測(cè)（MAT法） 試劑盒在靈敏度、穩(wěn)定性與適用性上表現(xiàn)突出，關(guān)鍵性能參數(shù)符合藥典要求：標(biāo)曲線性范圍 0.0125-1.0EU/mL，相關(guān)系數(shù) R2≥0.98，定量限 0.025EU/mL，檢測(cè)限（LOD）0.0125EU/mL，批間精密度 CV≤25%，可準(zhǔn)確捕捉微量熱原。其優(yōu)勢(shì)在于特定的單核細(xì)胞系 —— 與依賴供體血液的 PBMC 細(xì)胞不同，申科 MAT 細(xì)胞系來(lái)源清晰可溯源，無(wú)需倫理審批與血站合作，規(guī)避供體差異導(dǎo)致的檢測(cè)波動(dòng)。對(duì)比同類型產(chǎn)品（如國(guó)外廠家 PBMC 細(xì)胞），申科細(xì)胞系的標(biāo)曲各濃度點(diǎn) CV 更低（ 低至3.6%）、相對(duì)偏差更?。?nbsp;12.31%），線性 R2 達(dá) 1.000，穩(wěn)定性更優(yōu)。此外，細(xì)胞凍存液組分經(jīng)優(yōu)化，復(fù)蘇后活率高，無(wú)需額外調(diào)整細(xì)胞狀態(tài)即可直接與供試品共孵育，操作便捷；且適配任何具備 450nm 波長(zhǎng)的酶標(biāo)儀，無(wú)需專門(mén)的設(shè)備，降低實(shí)驗(yàn)室投入成本。

PyroSHENTEK^®熱原檢測(cè)試劑盒依據(jù) ICH Q2 (R2)、《中國(guó)藥典》（如通則 9301）及歐洲藥典（EP 2.6.30）要求，完成了線性、范圍、定量限、準(zhǔn)確度、精密度、耐用性等全維度性能驗(yàn)證。線性方面，0.0125-1.0EU/mL范圍內(nèi)擬合良好，R2≥0.98；準(zhǔn)確度通過(guò)加標(biāo)回收實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證，不同樣品基質(zhì)（如生物制品、化學(xué)制藥原料）的回收率均落在 50%-200% 區(qū)間；精密度表現(xiàn)優(yōu)異，批內(nèi)與批間 CV 均≤15%，且無(wú)論是 3 復(fù)孔還是 4 復(fù)孔檢測(cè)均能達(dá)標(biāo)。此外，試劑盒使用中國(guó)藥典推薦的 MAT 特定標(biāo)準(zhǔn)品，可直接用于國(guó)內(nèi)外申報(bào)，契合全球 “3R 原則” 監(jiān)管導(dǎo)向—尤其適配《歐洲藥典》刪除家兔法、《美國(guó)藥典》鼓勵(lì) MAT 替代等新法規(guī)趨勢(shì)，為企業(yè)應(yīng)對(duì)不同地區(qū)的熱原檢測(cè)合規(guī)要求提供有力支持。

MAT 法與傳統(tǒng)家兔法在熱原檢測(cè)中，性能差異明顯，MAT 法在準(zhǔn)確性、效率與合規(guī)性上更具優(yōu)勢(shì)。從結(jié)果評(píng)判來(lái)看，MAT 法以 “加標(biāo)回收率 50%-200%、供試品濃度 < 規(guī)定限值（CLC）” 為合格標(biāo)準(zhǔn)，靈敏度達(dá) 0.0125EU/mL，可準(zhǔn)確定量熱原濃度；而家兔法只能定性（觀察體溫升高），靈敏度低（約 0.1-0.5EU/mL），易因家兔個(gè)體差異（如免疫狀態(tài)、應(yīng)激反應(yīng)）導(dǎo)致假陰性。從檢測(cè)效率來(lái)看，MAT 法樣品與細(xì)胞共培養(yǎng) 24 小時(shí)即可出結(jié)果，且可批量檢測(cè)（96 孔板一次處理多個(gè)樣品）；家兔法需連續(xù)觀察 72 小時(shí)，每次只能檢測(cè)少量樣品，耗時(shí)且人力成本高。從合規(guī)性來(lái)看，MAT 法不使用動(dòng)物，符合 3R 原則，已被歐盟接受（EP 刪除家兔法）；家兔法因動(dòng)物實(shí)驗(yàn)屬性，面臨歐盟等地區(qū)的法規(guī)限制。此外，MAT 法重復(fù)性優(yōu)（復(fù)孔 CV 可控制在 30% 以內(nèi)），家兔法因個(gè)體差異 CV 常超 50%，進(jìn)一步凸顯 MAT 法在現(xiàn)代熱原檢測(cè)中的優(yōu)勢(shì)。

MAT 試劑盒配套的即用型細(xì)胞存在明確的傳代限制，且商業(yè)化傳代需獲得授權(quán)，關(guān)鍵是保障細(xì)胞質(zhì)量與檢測(cè)可靠性。首先，即用型細(xì)胞經(jīng)特殊工藝優(yōu)化，已處于較好的活性與熱原響應(yīng)狀態(tài)，不適合傳代，傳代后細(xì)胞會(huì)出現(xiàn) TLR 受體表達(dá)下降、炎癥因子分泌減少等問(wèn)題，導(dǎo)致熱原檢測(cè)靈敏度降低，如 HL-60 細(xì)胞傳代超過(guò) 5 代后，IL-6 分泌量下降 30%，無(wú)法滿足檢測(cè)要求。其次，若用戶需將即用型細(xì)胞用于商業(yè)化生產(chǎn)（如大規(guī)模檢測(cè)），需獲得湖州申科授權(quán)，包括用戶資質(zhì)審核、技術(shù)培訓(xùn)、傳代方案驗(yàn)證，確保用戶具備細(xì)胞培養(yǎng)與質(zhì)量控制能力，避免未經(jīng)授權(quán)傳代導(dǎo)致細(xì)胞特性改變，影響檢測(cè)結(jié)果一致性。此外，參考文獻(xiàn)數(shù)據(jù)，即使是可傳代的單核細(xì)胞系，使用代次也不超過(guò) 20 代，超過(guò)后代次細(xì)胞穩(wěn)定性差，因此即用型細(xì)胞設(shè)計(jì)為 “一次性使用”，從源頭避免傳代帶來(lái)的風(fēng)險(xiǎn)。用戶需嚴(yán)格遵守傳代限制，若需長(zhǎng)期使用，建議定期采購(gòu)新批次試劑盒，確保細(xì)胞質(zhì)量。

熱原是指微量即可引發(fā)恒溫動(dòng)物體溫異常升高的物質(zhì)，分為內(nèi)源性（如細(xì)胞因子）與外源性兩類，外源性熱原又涵蓋微生物來(lái)源（革蘭氏陰性菌脂多糖 LPS、革蘭氏陽(yáng)性菌脂磷壁酸 LTA、病毒、真菌等）與非微生物來(lái)源（灰塵、橡膠降解產(chǎn)物等）。傳統(tǒng)細(xì)菌內(nèi)毒素檢查法（BET）只能檢測(cè)革蘭氏陰性菌的 LPS，無(wú)法覆蓋非內(nèi)毒素?zé)嵩鴨魏思?xì)胞活化試驗(yàn)（MAT）可彌補(bǔ)這一缺陷。其原理是：熱原通過(guò)活化單核細(xì)胞表面的 Toll 樣受體（TLR，如 TLR4 識(shí)別 LPS、TLR2/TLR6 識(shí)別 LTA），啟動(dòng)先天免疫反應(yīng)，促使細(xì)胞釋放 IL-6、TNF-α 等促炎細(xì)胞因子；隨后采用 ELISA 法檢測(cè) IL-6 濃度，結(jié)合 LPS 標(biāo)準(zhǔn)曲線推算樣品中總熱原含量，實(shí)現(xiàn)對(duì)內(nèi)毒素與非內(nèi)毒素?zé)嵩耐綑z測(cè)，契合《中國(guó)藥典》9301 指導(dǎo)原則中 全場(chǎng)景防控?zé)嵩L(fēng)險(xiǎn)”的要求。

中國(guó)藥典與歐洲藥典對(duì) MAT 熱原檢測(cè)的細(xì)胞類型及復(fù)孔數(shù)有明確要求，且存在細(xì)節(jié)差異。細(xì)胞類型上，兩者均認(rèn)可人全血、PBMC（外周血單個(gè)核細(xì)胞，至少 4 個(gè)供體，歐洲藥典建議 8 個(gè)供體），中國(guó)藥典明確將單核細(xì)胞系納入，歐洲藥典則要求單核細(xì)胞系需做支原體污染檢測(cè)、細(xì)胞鑒別等；檢測(cè)方法均為 “熱原刺激細(xì)胞 + ELISA 檢測(cè) IL-6/IL-1β/TNF-α”。復(fù)孔數(shù)方面，兩者均規(guī)定平行孔≥4、濃度點(diǎn)≥4，中國(guó)藥典額外要求標(biāo)曲 r≥0.90，主要目的是通過(guò)多重復(fù)孔抵消 PBMC 的不穩(wěn)定性，確保熱原檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確可靠。