③末端標記法(又叫尾標)。利用末端轉移酶可進行“尾標”,尾標適用于寡核苷酸探針標記,寡核苷酸探針多用于核酸“點”突變的檢測,該探針可用核酸合成儀人工合成,克隆出的探針一般較長,特異性好,標記量大,雜交的檢出信號強。探針合成的注意事項①合成探針的長短,一般在20~50個核苷酸之間。合成過長成本高,且易出現聚合酶合成錯誤,雜交時間長,合成太短則特異性下降。②堿基組成G-C應含40%~60%,一種堿基連續重復不超過4個,以免非特異性雜交產生。③探針自身序列內應無互補區域,以免產生“發夾”結構,影響雜交。總之,一個好的探針**終要在實踐中才能加以確認。分析對象是固體物質表面細小顆粒或微小區域,小范圍直徑為1μm。上海特制探針五星服務
電子探針X射線顯微分析儀(簡稱電子探針)利用約1Pm的細焦電子束,在樣品表層微區內激發元素的特征X射線,根據特征X射線的波長和強度,進行微區化學成分定性或定量分析。電子探針的光學系統、真空系統等部分與掃描電鏡基本相同,通常也配有二次電子和背散射電子信號檢測器,同時兼有組織形貌和微區成分分析兩方面的功能。電子探針的構成除了與掃描電鏡結構相似的主機系統以外,還主要包括分光系統、檢測系統等部分。電子探針主要由電子光學系統(鏡筒),X射線譜儀和信息記錄顯示系統組成。電子探針和掃描電鏡在電子光學系統的構造基本相同,它們常常組合成單一的儀器。上海特制探針五星服務波譜儀的關鍵在于怎樣實現將未知的特征譜線與已知元素Z聯系起來?
早期采用的RNA探針是細胞mRNA探針和病毒RNA探針,這些RNA是在細胞基因轉錄或病毒復制過程中得到標記的,標記效率往往不高,且受到多種因素的制約。這類RNA探針主要用于研究目的,而不是用于檢測。例如,在篩選逆轉錄病毒人類免疫缺陷病毒(HIV)的基因組DNA克隆時,因無DNA探針可利用,就利用HIV的全套標記mRNA作為探針,成功地篩選到多株HIV基因組DNA克隆。又如進行中的轉錄分析(nuclearrunontranscrip-tionassay)時,在體外將細胞核分離出來,然后在α-32P-ATP的存在下進行轉錄,所合成mR-NA均摻入同位素而得到標記,此混合mRNA與固定于硝酸纖維素濾膜上的某一特定的基因的DNA進行雜交,便可反映出該基因的轉錄狀態,這是一種反向探針實驗技術。
這樣我們可以事先建立一系列θ角與相應元素的對應關系,當某個由電子束激發的X特征射線照射到分光晶體上時,我們可在與入射方向交成2θ角的相應方向上接收到該波長的X射線信號,同時也就測出了對應的化學元素。只要令探測器連續進行2θ角的掃描,即可在整個元素范圍內實現連續測量。由分光晶體所分散的單一波長X射線被X射線檢測器接受,常用的檢測器一般是正比計數器。當某一X射線光子進入計數管后,管內氣體電離,并在電場作用下產生電脈沖信號。電子探針主要由電子光學系統(鏡筒),X射線譜儀和信息記錄顯示系統組成。
DNA探針是**常用的核酸探針,指長度在幾百堿基對以上的雙鏈DNA或單鏈DNA探針。現已獲得DNA探針數量很多,有細菌、病毒、原蟲、***、動物和人類細胞DNA探針。這類探針多為某一基因的全部或部分序列,或某一非編碼序列。這些DNA片段須是特異的,如細菌的毒力因子基因探針和人類Alu探針。這些DNA探針的獲得有賴于分子克隆技術的發展和應用。以細菌為例,分子雜交技術用于細菌的分類和菌種鑒定比之G+C百分比值要準確的多,是細菌分類學的一個發展方向。加之分子雜交技術的高敏感性,分子雜交在臨床微生物診斷上具有廣闊的前景。近年形成了掃描電鏡-顯微分析儀的聯合裝置,可在觀察微區形貌的同時逐點分析試樣的化學成分及結構。徐匯區品牌探針售價
電子探針在鏡筒部分與掃描電鏡明顯不同之處是由光學顯微鏡。上海特制探針五星服務
探針的標記也可以采用隨機引物法,即向變性的探針溶液加入6個核苷酸的隨機DNA小片段,作為引物,當后者與單鏈DNA互補結合后,按堿基互補原則不斷在其3’OH端添加同位素標記的單核苷酸,這樣也可以獲得比放射性很高的DNA探針。DNA探針是以病原微生物DNA或RNA的特異性片段為模板,人工合成的帶有放射性或生物素標記的單鏈DNA片段,可用來快速檢測病原體。DNA探針將一段已知序列的多聚核苷酸用同位素、生物素或熒光染料等標記后制成的探針。可與固定在硝酸纖維素膜的DNA或RNA進行互補結合,經放射自顯影或其他檢測手段就可以判定膜上是否有同源的核酸分子存在。上海特制探針五星服務
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