上海合規性內毒素檢測操作步驟

來源：發布時間：2025-10-05

低內毒素回收（LER）的主要形成機制之一是螯合劑與非離子表面活性劑的協同作用，直接影響內毒素檢測結果。第一步，樣品中的螯合劑（如檸檬酸鹽）會去除二價陽離子（Mg2?、Ca2?），削弱 LPS 聚集體的鹽橋結構，降低其剛性；第二步，表面活性劑（如吐溫 20）嵌入 LPS 分子，形成混合聚集體（膠體、層狀結構），改變 LPS 的超分子形態。LPS 從 “可檢測態” 轉為 “不可檢測態”，導致鱟試劑中的 C 因子無法與內毒素結合，內毒素檢測出現假陰性。這種變化是時間依賴的，與稀釋度無關，給常規內毒素檢測帶來獨特挑戰。

β- 葡聚糖刺激 G 因子致假陽性，用含抗增液的鱟試劑可優化內毒素檢測結果。上海合規性內毒素檢測操作步驟

重組級聯試劑（rCR）通過完整模擬天然鱟試劑的酶促級聯反應路徑，實現高效且特異的內毒素檢測。其反應機制為：內毒素首先活化重組 C 因子，活化的 C 因子進一步活化重組 B 因子，隨后活化重組凝固酶原轉化為凝固酶，再催化顯色底物產生黃色信號（405nm 波長可檢測）。這一級聯放大過程有效提升了檢測靈敏度，即使微量內毒素也能產生可識別信號。與單因子的重組 C 因子法（rFC）相比，rCR 的多因子級聯反應抗干擾能力更強，尤其對復雜基質樣品（如高蛋白單抗、疫苗）表現更優。同時，rCR 剔除了天然鱟試劑中的 G 因子，避免了與 β-D 葡聚糖的非特異性反應，從根本上減少假陽性結果，保障檢測數據的可靠性。

重組蛋白內毒素檢測重組級聯試劑（rCR）湖州申科生物為內毒素檢測提供替代方法驗證，包含重組級聯試劑（rCR）與天然鱟試劑的橋接數據。

血液制品（如白蛋白、免疫球蛋白、凝血因子）來源于人血漿，內毒素污染風險高，且基質中含大量蛋白質、脂質等干擾物質，檢測難度較大。傳統 LAL 法易受血漿蛋白抑制，需通過預處理去除干擾：如采用三氯乙酸沉淀蛋白、超速離心分離脂質，或使用特定去干擾試劑（如內毒素提取試劑）。此外，血液制品內毒素限值較低，需選用高靈敏度檢測方法（如動態顯色法，LOD=0.005 EU/mL）。檢測過程中需嚴格區分 “內源性內毒素”（血漿中天然存在）與 “外源性污染”，通過工藝優化（如巴氏滅活、納米膜過濾）降低外源性內毒素殘留，保障臨床用藥安全。

低內毒素回收（LER）又稱內毒素掩蔽，是指無菌制劑（尤其蛋白類生物制劑）進行內毒素檢測時，加標內毒素的回收率＜50% 的現象，且無法通過稀釋排除，區別于傳統檢測干擾。LER 會導致內毒素污染被低估，已被全球監管機構重點關注：FDA 2013 年要求生物藥 BLA 申報時提交 LER 研究報告；EMA 2023 年明確含表面活性劑（如吐溫）或螯合劑（如 EDTA）的制劑需提供 LER 數據；中國藥典 2025 版 9251 通則也新增 LER 內容，與國際接軌。這些要求促使企業優化內毒素檢測流程，避免因 LER 導致的檢測偏差，確保藥品安全。

細菌內毒素是革蘭氏陰性菌細胞壁脂多糖，細菌死亡裂解釋放，微量級即致人體發熱、休克等威脅。

β- 葡聚糖是鱟試劑（LAL）檢測內毒素的常見干擾物，可活化 LAL 中的 G 因子通路，導致假陽性結果。干擾多見于含植物源原料的樣品（如中藥注射劑）、生物發酵產物或環境真菌污染的樣品。消除方法包括：使用特異性 LAL 試劑（如添加葡聚糖抑制劑的 LAL），其只對內毒素敏感而不受 β- 葡聚糖影響；采用加熱處理（如 80℃加熱 10 分鐘）破壞 β- 葡聚糖結構；或通過親和層析去除樣品中的 β- 葡聚糖。檢測時需設置 β- 葡聚糖陽性對照，若對照反應陽性而內毒素標準品無反應，表明存在干擾，需優化前處理步驟后重新檢測。

內毒素檢測需關注制劑成分，螯合劑和表面活性劑可能誘發“低內毒素回收（LER）”。廣東化學制藥內毒素檢測商業化試劑盒

內毒素工作標準品（CSE）稀釋液配制時渦旋很重要，可使內毒素充分溶解，保證濃度準確。上海合規性內毒素檢測操作步驟

內毒素檢測常與熱原檢測混淆，二者既有關聯又有區別：熱原是指所有能引起發熱的物質（包括內毒素、病毒、真菌等），通過傳統家兔熱原試驗檢測；內毒素是熱原的主要成分（占 90% 以上），檢測更具特異性。目前，家兔熱原試驗因操作復雜、動物成本高，已逐漸被單核細胞活化反應測定法（MAT）替代，但部分產品（如放射性質藥物、血液制品）仍需保留家兔試驗作為補充。法規要求內毒素檢測結果需與熱原風險關聯，若內毒素檢測合格但臨床出現熱原反應，需排查是否存在非內毒素類熱原，通過聯合檢測確保產品安全性。

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標簽：宿主細胞蛋白（HCP）殘留檢測宿主細胞殘留DNA檢測熱原檢測內毒素檢測

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